Problèmes de détecteur

Dans les deux dernières modules, nous avons exploré les facteurs affectant la durée de vie de la colonne. Au-delà de la colonne, chaque système (U)HPLC s'appuie sur un détecteur pour visualiser les substances séparées chromatographiquement. Cette section met en évidence les problèmes courants liés aux détecteurs et leurs causes possibles.

Pour les détecteurs à indice de réfraction et de conductivité, la température de la cellule a un impact particulièrement important sur la ligne de base. Si la température est instable, le RID peut présenter une dérive de la ligne de base. La figure ci-dessous démontre comment de petites fluctuations de température dans la cellule de flux RID peuvent avoir un impact significatif sur la ligne de base.

Pour minimiser la dérive, le système de contrôle de température, inclus en équipement standard, doit être ajusté en fonction de la température ambiante, du débit de l'éluant et d'autres conditions. Il est généralement recommandé de le régler au-dessus de la température ambiante pour une stabilité optimale.

Pics négatifs

 

Les pics négatifs peuvent apparaître dans un chromatogramme en raison de différences dans les principes de détection. Dans un détecteur à indice de réfraction (RI), un pic négatif indique que l'indice de réfraction de l'échantillon est inférieur à celui de l'éluant. Pour obtenir des pics positifs, la polarité du détecteur peut être inversée.

Dans un détecteur UV, des pics négatifs se produisent lorsque l'échantillon absorbe moins de lumière UV que l'éluant. Ce problème peut souvent être résolu en utilisant une phase mobile différente avec une absorbance UV plus faible. Si le recyclage de l'éluant est en cours, remplacer l'éluant recyclé par un solvant frais peut aider à prévenir les interférences.

Les problèmes de sensibilité en chromatographie peuvent provenir de divers facteurs, tels que des pertes d'échantillon lors de la préparation ou des volumes d'injection incorrects. Un autre facteur critique est la concentration de l'échantillon, qui peut avoir un impact significatif sur les performances du détecteur. Si la concentration est trop élevée ou trop basse, elle peut tomber en dehors de la plage linéaire du détecteur, entraînant des résultats inexactes.

Dans la détection par absorption UV, la loi de Beer-Lambert définit la relation entre l'absorbance, le coefficient d'extinction, la concentration et la longueur du trajet optique (voir la figure à gauche). Ce principe permet des calculs de concentration basés sur l'absorbance. Cependant, la relation linéaire entre la concentration et l'absorbance ne tient que dans une plage spécifique, définie par la limite de détection (LOD) et la concentration maximale (voir la figure à droite). En dehors de cette plage, les mesures de concentration deviennent peu fiables.