Dans la plupart des cas, la quantification est réalisée en utilisant la surface d'un pic. Si la surface du pic fluctue en raison d'influences externes, cela conduit à une surestimation ou une sous-estimation de la quantité d'analyte. Ainsi, le résultat ne correspond pas à la réalité. Pour obtenir des résultats cohérents et fiables, nous allons explorer dans cette section les aspects liés à l'injection de l'échantillon et à la température de la cellule du détecteur.

1. Variabilité du volume d'injection

La cause la plus courante des fluctuations de surface de pic est la variation du volume d'injection. Pour vérifier toute variation, il est recommandé d'effectuer des injections répétées d'un référent avec une concentration connue. Des conditions constantes doivent toujours être maintenues, comme vous pouvez le voir dans le tableau à droite, même le rinçage de l'aiguille peut avoir un impact significatif sur la déviation. Cependant, il est toujours bon de s'assurer que l'aiguille est rincée entre les injections pour éviter tout carryover d'échantillon.
Pour les échantillons très visqueux, la vitesse d'aspiration doit être réduite, car des bulles d'air pourraient autrement être aspirées, ce qui entraînera une variation significative de la quantité d'échantillon qui parvient finalement à la colonne.

Les bulles d'air dans la solution de rinçage ou une solution de rinçage vide peuvent également entraîner des fluctuations dans les surfaces de pic. Par conséquent, il est également recommandé de purger régulièrement toutes les lignes.

2. Adsorption dans l'injecteur

Comme vous pouvez le voir dans le tableau à droite, selon la substance, différents effets d'adsorption peuvent se produire sur l'aiguille d'injection ou le joint. Cinq injections répétées de standards de caféine et de thiamine ont été injectées et mesurées en utilisant la même méthode, mais la thiamine montre deux fois l'écart type. Dans ce cas, la solution de rinçage de l'injecteur et le programme de prétraitement doivent être ajustés aux analytes.

Pour vérifier la répétabilité, un étalon interne résistant à l'adsorption doit toujours être utilisé.

3. Fluctuations de température du détecteur

La température de détection dans la cellule de mesure a un impact significatif sur le signal. Si la température fluctue, le signal fluctue également en hauteur. Les détecteurs à indice de réfraction sont particulièrement sensibles aux changements de température. Cependant, les détecteurs UV/Vis ou les détecteurs de fluorescence réagissent également aux changements de température. Par exemple, si la température de la cellule du détecteur de fluorescence augmente, le signal diminue. Par conséquent, le contrôle de la température des cellules du détecteur est essentiel.
De plus, la température ambiante doit être maintenue aussi constante que possible. Le système ne doit pas être placé dans un courant d'air, directement sous une unité de climatisation ou en plein soleil. Comme vous pouvez le voir sur l'image à droite, même un changement relativement petit de température (par exemple, les changements de température du laboratoire du printemps à l'été) peut impacter le résultat.

Méthodes de troubleshooting :
Tout d'abord, vous devez vérifier le passeur d'échantillons. Si ce n'est pas la cause de la fluctuation de la surface de pic, le détecteur doit être vérifié. Dans de rares cas, l'adsorption des analytes sur le matériau de remplissage de la colonne peut en être la cause. C'est particulièrement le cas avec les colonnes ODS et les substances basiques, chélatantes. Vérifiez la compatibilité de la colonne utilisée pour votre analyse. Si suffisamment d'informations ne sont pas trouvées dans la fiche technique de la colonne, il est recommandé de contacter le fabricant de la colonne.

Choses à considérer quotidiennement :

Général :

Effectuer régulièrement des tests de conformité
Vérifier le système avec plusieurs répétitions d'un référent
Documenter les temps de rétention, la résolution, etc. des solutions de référence

Système :

Tenir un journal de la colonne
Documenter l'entretien
Ajuster le prétraitement de la matrice de l'échantillon
Sélectionner une solution de rinçage appropriée
Utiliser des cellules de détecteur chauffées

En plus des fluctuations de surface de pic, les fluctuations du temps de rétention sont un problème courant. Par conséquent, les deux prochaines parties du cours de troubleshooting aborderont les raisons possibles des fluctuations du temps de rétention et comment elles peuvent être résolues.

Votre équipe Shimadzu LC