Les pics indésirables dans les chromatogrammes, souvent appelés pics fantômes, peuvent interférer considérablement avec l'évaluation des données et potentiellement produire de faux résultats, surtout s'ils coéluent avec les analytes cibles. Par conséquent, éviter ces pics et ceux provenant de contaminants est un aspect critique de l'analyse chromatographique.

Les pics fantômes peuvent provenir de diverses sources, y compris des élutions, de l'échantillon ou de sa matrice, et des perturbations liées au système. Voici les causes les plus courantes et les moyens de les atténuer :

1. Éluants contaminés

Les élutions sont particulièrement sujettes à la contamination, ce qui peut conduire à des pics fantômes. Pour minimiser ce risque, remplacez régulièrement les conteneurs de stockage, au lieu de les remplir en continu, car le remplissage peut concentrer les contaminants et augmenter les perturbations.

Faites particulièrement attention à la qualité de l'eau. Si vous utilisez un système de purification de l'eau, assurez-vous qu'il subit un entretien régulier. L'influence de l'eau contaminée sur la chromatographie peut être vue dans les images suivantes.

Par exemple, lors d'un gradient de 100 % eau à 100 % acétonitrile, des contaminants peuvent s'accumuler à la tête de la colonne pendant les premières étapes. À mesure que la proportion d'acétonitrile augmente, la force d'élution croît, provoquant l'élution des contaminants et leur apparition sous forme de pics fantômes.

2. Solvants incorrects

L'utilisation de solvants inappropriés peut également entraîner des pics fantômes. Selon le fabricant, certains solvants, y compris certains marqués comme de qualité spéciale LC-MS, peuvent contenir des substances actives en UV qui interfèrent avec la détection UV mais pas avec l'ionisation lors de l'analyse MS. Pour prévenir cela, sélectionnez des solvants appropriés pour votre méthode de détection et, si des pics fantômes apparaissent dans les blancs, testez des lots de solvant alternatifs ou changez de fournisseur.

3. Temps d'équilibrage inadéquat

Un développement de méthode approprié nécessite un temps d'exécution suffisant pour éluer toutes les substances de la colonne. Un équilibrage insuffisant peut entraîner des pics fantômes dus à un carryover entre les mesures. Ce problème est particulièrement fréquent dans les échantillons avec des matrices complexes. Pour y remédier, mettez en œuvre une étape de rinçage à la fin de chaque méthode et assurez-vous d'un équilibrage adéquat de la colonne avant de commencer l'injection suivante.

En plus des facteurs mentionnés précédemment, un solvant d'échantillon contaminé peut également provoquer des pics fantômes. Un excès d'air dissous dans l'échantillon peut entraîner l'apparition de pics au début du chromatogramme. De plus, des impuretés dans le circuit fluidique peuvent s'éluer à mesure que la force d'élution de la phase mobile augmente, contribuant à l'apparition de pics fantômes.

Choses à considérer quotidiennement :

Assurez-vous d'utiliser des éluants de haute qualité et évitez la contamination
Utilisez toujours le solvant approprié pour le type de détection respectif
Un solvant d'échantillon contaminé peut également entraîner des pics fantômes - vérifiez que la préparation des échantillons minimise les impuretés
Remplacez régulièrement les conteneurs de stockage, ne les remplissez pas
Rincez régulièrement la colonne et le circuit fluidique pour éliminer les contaminants résiduels

Dans le prochain module, nous aborderons les fluctuations de surface de pic.

Votre équipe Shimadzu LC