Perturbations de la ligne de base
Cours de troubleshooting HPLC
1 - Notions de base du troubleshooting
2 - Mesures de maintenance préventive
3 - Perturbations de la ligne de base
4 - Fluctuations de pression
5 - Changements de forme de pic - Partie 1
6 - Changements de forme de pic - Partie 2
7 - Pics fantômes
8 - Fluctuations des surfaces des pics
9 - Fluctuations du temps de rétention - Partie 1
10 - Fluctuations du temps de rétention - Partie 2
11 - Durée de vie de la colonne - Partie 1
12 - Durée de vie de la colonne - Partie 2
13 - Problèmes de détecteur
14 - Fuites dans la ligne de flux
15 - Résumé du cours
1. Perturbations "Positives"
Les perturbations de la ligne de base sont une occurrence courante en chromatographie et sont susceptibles d'être trouvées dans chaque chromatogramme. Cependant, toutes les perturbations ne sont pas problématiques, car elles peuvent être liées au système et peuvent elles-mêmes être utilisées comme outil de diagnostic. La plus courante est le changement de ligne de base associé à l'injection elle-même. Lorsque l'échantillon est injecté, le temps qu'il faut pour traverser la colonne sans aucune interaction avec la colonne elle-même est connu sous le nom de temps mort de la colonne.
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Les pics au temps mort sont très courants, principalement en raison des différences entre le solvant de l'échantillon et la phase mobile. Le changement de position de la vanne d'injection au début de l'analyse peut également provoquer un pic d'injection avec des échantillons très visqueux. Si cela pose problème, le solvant de l'échantillon peut être ajusté pour correspondre aux conditions de départ de la méthode, en fonction de la solubilité de l'échantillon. Même une dérive uniforme de la ligne de base peut être normale. Chaque solvant a une coupure UV, qui est le point où le solvant commence à absorber la lumière UV. Lors de l'exécution d'un gradient à une longueur d'onde inférieure à la coupure UV du solvant, l'absorption augmente avec la concentration du solvant, entraînant une élévation de la ligne de base. Cet effet est observé non seulement dans des solvants organiques comme l'acétonitrile ou le méthanol, mais aussi dans des tampons aqueux ou des solutions acidifiées. |
2. Dérives de la ligne de base
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Les dérives de la ligne de base en chromatographie peuvent provenir de divers facteurs au-delà de l'absorption inhérente du solvant. Les causes courantes incluent la contamination et les fluctuations de température. La contamination dans le circuit fluidique ou la colonne entraîne souvent des lignes de base erratiques, se produisant à la fois dans des mesures isocratiques et en gradient. À mesure que la proportion de solvant organique augmente, la force d'élution augmente également, ce qui peut libérer des contaminants dans le système. Les fluctuations de température sont un autre facteur significatif, souvent reflété dans le chromatogramme. Sans contrôle approprié de la température de la colonne ou de la cellule du détecteur, la ligne de base a tendance à suivre les changements de température ambiante avec un certain retard, en particulier lors d'analyses en mode isocratique prolongé. Des changements indésirables dans la composition de l'éluant peuvent également provoquer une dérive de la ligne de base. Ces changements peuvent résulter de problèmes tels qu'une pompe défectueuse ou l'utilisation d'une phase mobile pré-mélangée stockée dans un flacon non scellé. |
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Pour comprendre l'erreur, nous recommandons la procédure suivante : 1. Remplacer la colonne par un capillaire à contre-pression 2. Arrêter le flux 3. Vérifier le détecteur |
3. Lignes de base bruyantes
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Le bruit accru de la ligne de base peut être classé comme régulier ou irrégulier. Le bruit régulier provient souvent d'effets de température, tels qu'une température excessive de la colonne ou l'absence de chauffage approprié dans le détecteur. D'autres causes potentielles incluent une lampe de détecteur vieillissante qui commence à scintiller ou des fuites dans la ligne d'écoulement. En revanche, le bruit irrégulier signale souvent des problèmes de système comme la contamination. Les bulles d'air dans le détecteur peuvent également entraîner des motifs de bruit erratiques, perturbant la stabilité du chromatogramme. |
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Procédure recommandée pour diagnostiquer les lignes de base bruyantes : 1. Vérifier la pression 2. Retirer la colonne et enregistrer le niveau de fond 3. Préparer des éluants frais et enregistrer le niveau de fond 4. Si aucune des étapes ci-dessus ne s'applique, vérifiez le détecteur |
Choses à considérer quotidiennement :
Éluants :
- Assurez-vous que la qualité des solvants et de la pureté correcte pour l'analyse
- Développez des méthodes pour contrôler les éluants et les réactifs
- Entretenez régulièrement le système de purification de l'eau
- Enregistrez le niveau de fond de la ligne de base
Détecteurs :
- Notez l'état d'utilisation des consommables
- Suivez les heures de fonctionnement des lampes dans les détecteurs optiques
- Enregistrez les valeurs de fond de ligne de base normales
Système HPLC :
- Maintenez une température et des conditions de laboratoire cohérentes
- Rincez régulièrement le circuit fluidique et la colonne avec soin
- Conservez des enregistrements d'utilisation
- Ayez toujours des pièces de rechange disponibles
Conditions analytiques :
- Choisissez des paramètres de détection simples et stables
- Sélectionnez des éluants avec un faible niveau d'absorbance dans le domaine de longueur d'onde exploité
- Développez des méthodes robustes
Suivre ces directives peut réduire la probabilité de fluctuations de la ligne de base. N'oubliez pas, la documentation est essentielle ! Connaître l'état de votre système HPLC permet de résoudre les problèmes plus rapidement et d'améliorer le troubleshooting.
Dans le prochain module, nous aborderons l'un des problèmes les plus courants : les fluctuations de pression.
D'ici là, bon dépannage !
Votre équipe Shimadzu LC