Analyse des modifications post-traductionnelles | Analyse de la modification du N-terminal d'une protéine synthétique par spectrométrie de masse

Analyse de la modification N-terminale d'une protéine synthétique par spectrométrie de masse

L’importance de l’analyse des modifications post-traductionnelles des protéines s’est accrue ces dernières années. Le type de modification peut être prédit dans une certaine mesure à partir de la séquence d’acides aminés, mais dans la pratique, des tests sont nécessaires pour en avoir la preuve.
Une méthode d’analyse de modification simple utilisant des cellules d’insectes Transdirect (Kit de synthèse de protéines sans cellules) en combinaison avec un spectromètre de masse MALDI-TOF est présentée ci-dessous.

Analyse de N-myristoylation : la N-myristoylation des protéines fait référence à la réaction de modification qui transfère le myristate, un acide gras saturé à 14 carbones, à la glycine résidant du N-terminal nouvellement exposé après l'élimination de la méthionine initiatrice. Cette modification a été reconnue dans de nombreuses protéines impliquées dans la transmission de l'information cellulaire. Il est connu pour jouer un rôle extrêmement important dans la liaison aux membranes et dans les interactions protéine-protéine. Nous avons analysé la tGelsolin dans laquelle la N-myristoylation est connue comme protéine modèle.

■ Flux de test

■ RésultatsL'ajout de myristoyl-CoA comme substrat pour la réaction de modification a abouti à la détection du fragment peptidique m/z 1926.2 que l'on pense résulter de la N-myristoylation (Fig. 1). L'analyse MS/MS a identifié ce pic comme étant un fragment peptidique N-terminal contenant le groupe myristoyle (Fig. 2).
La même méthode peut être appliquée pour analyser la N-acétylation et l’élimination de la méthionine initiatrice.

Les résultats ci-dessus montrent que Transdirect a la capacité de provoquer les modifications protéiques typiques se produisant au niveau N-terminal. En combinaison avec un spectromètre de masse, on peut constater que cette méthode constitue un outil puissant pour l’analyse des modifications N-terminales.

* Ce sont les résultats d'une recherche conjointe menée avec le professeur Toshihiko Utsumi, de la faculté de médecine de l'université Yamaguchi.

Cellule d'insecte transdirecte (Kit de synthèse de protéines sans cellules)

Il s'agit d'un nouveau kit de synthèse de protéines acellulaires dérivé de cultures de cellules d'insectes. Il atteint une capacité de synthèse protéique supérieure à celle d'un système de lasate réticulocytaire de lapin. Le kit est livré avec des tampons de réaction et des vecteurs d’expression optimisés pour permettre de réaliser facilement des tests de synthèse protéique optimaux.

Spectrométrie de masse MALDI-TOF

• Utilise une technologie unique de piège à ions quadripolaire pour des mesures spectrales MS ⁿ très sensibles et précises des ions moléculaires produits par MALDI.
• La sélectivité élevée des ions précurseurs offre une sélection fiable des ions cibles uniquement, même en présence d'un grand nombre d'ions d'impuretés, pour permettre l'acquisition de données d'analyse MS ⁿ de haute qualité .
• Offre des données d'analyse MS ⁿ très précises qui permettent une prévision structurelle précise.
• Le logiciel d'analyse fournit un support puissant pour l'analyse structurelle des glycopeptides.