Analyse structurelle de la chaîne sucrière (LCMS-IT-TOF)

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Analyse des anticorps monoclonaux de souris de laboratoire

Comme les chaînes de sucres dans les glycoprotéines telles que les anticorps sont ajoutées par les actions de plusieurs enzymes après la traduction des protéines, la diversité et la non-uniformité de la structure de la chaîne de sucres constituent un problème inévitable. Les lignes directrices exigent une analyse aussi poussée que possible des structures de la chaîne du sucre. Comme la relation entre l'existence du fucose (un composant des chaînes de sucre) et la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC) a été rapportée, par exemple, l'importance des chaînes de sucre dans les médicaments à base d'anticorps pour la recherche et le développement augmentera à l'avenir.

Flux d'expérimentation et de recherche

  1. Effectuer SDS-PAGE et exciser les bandes équivalentes aux anticorps du gel coloré.
  2. Effectuer une digestion en gel à l’aide de PNGaseF.
  3. Purifiez les chaînes de sucre à l’aide du kit BlotGlyco (fabriqué par Sumitomo Bakelite Co., Ltd.) et ajoutez des marqueurs pyridylamino (PA).
  4. Effectuez une analyse MSn à l’aide de Prominence nano/LCMS-IT-TOF.

Resultats

Fig. 1 Chromatogramme MS par nanoLCMS-IT-TOF

La figure 1 montre les chromatogrammes de masse de m/z 696,7672, m/z 769,2833, m/z 850,3369 et m/z 931,3477.

Les figures 2 et 3 montrent les spectres MS/MS utilisant les ions précurseurs du chromatogramme de masse de la figure 1.
Les structures de chaîne de sucre prédites par le logiciel de prédiction de structure de chaîne de sucre sont présentées dans le diagramme.

Le système est capable de déterminer facilement l’existence du fucose, impliqué dans la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC).

En plus des chaînes de sucre des figures 2 et 3, l'existence d'autres chaînes de sucre de structure G1 et G2 a été confirmée.

Comme cette analyse utilisait des anticorps excisés du gel comme substance de démarrage, Prominence nano/LCMS-IT-TOF a été utilisé pour l'analyse des traces.

Fig. 2 Spectre MS/MS et structures prévues de la chaîne de sucre (ion précurseur m/z 696,7672[M-2H]2-)

Fig. 3 Spectre MS/MS et structures prévues de la chaîne de sucre (ion précurseur m/z 769,2833[M-2H]2-)

Spectromètre de masse par chromatographe liquide haute performance

sample
  • Le spectromètre de masse-chromatographe liquide haute performance LCMS-IT-TOF produit des informations MSn avec une précision de masse élevée, idéales pour l'analyse de la chaîne du sucre.
  • Une combinaison du chromatographe liquide haute performance Prominence nano Nanoflow avec l'interface NES-100 NanoESI offre une analyse très sensible de la chaîne du sucre.
  • La grande précision de masse du LCMS-IT-TOF permet une estimation très précise de la chaîne du sucre.
  • L'enquête sur les pertes neutres évalue automatiquement les pertes neutres spécifiques prédéfinies dans le spectre MS2 et exécute les mesures MS3.
  • Un logiciel dédié fournit un support puissant pour l’analyse structurelle des chaînes sucrières.