Cartographie peptidique
La cartographie peptidique implique le clivage sélectif des anticorps cibles individuels à l'aide d'une enzyme ou d'un produit chimique approprié et l'analyse des fragments peptidiques obtenus par HPLC ou une autre méthode appropriée. Les directives exigent l'identification des fragments peptidiques séparés par LC sur une plage aussi large que possible, en utilisant l'analyse de la composition en acides aminés, l'analyse de la séquence d'acides aminés N-terminale ou la spectrométrie de masse.
La cartographie peptidique des substances et produits médicamenteux par une méthode analytique convenablement validée est généralement réalisée pour confirmer la structure des anticorps cibles conformément à la norme et à la procédure de test pour chaque lot.
Comme cette méthode exploite les différences dans les temps de rétention LC, la reproductibilité est le point majeur. La page suivante présente les résultats de la cartographie peptidique de la myoglobine du cœur de cheval à l’aide d’un chromatographe liquide haute performance (HPLC).
Analyse de la myoglobine du muscle cardiaque du cheval

Flux d'expérimentation et de recherche
- Effectuer une digestion enzymatique de la myoglobine du muscle cardiaque du cheval en trypsine.
- Effectuer une analyse LC/MS de la digestion de trypsine à l’aide d’une colonne en phase inverse.
Resultats
La figure 1 montre le chromatogramme ionique total de la digestion par la trypsine de la myoglobine du muscle cardiaque du cheval. La figure 2 montre le spectre MS du pic 16 à titre d'exemple. La figure 3 montre une comparaison partielle des valeurs théoriques et des valeurs mesurées LC/MS pour la digestion par la trypsine. La figure 4 montre les taux de récupération des peptides dérivés de la myoglobine du muscle cardiaque du cheval obtenus en utilisant ce procédé.
Tous les peptides (hormis la lysine à l'état d'acide aminé) sont identifiés. (Les peptides récupérés sont soulignés dans le diagramme.)
La méthode de cartographie peptidique compare les temps d'élution des peptides pour déterminer facilement les différences dans la séquence d'acides aminés entre un échantillon standard et un échantillon test. La précision peut être encore améliorée en utilisant des modèles MS et MS/MS et le système de séquenceur de protéines en plus des temps d'élution des peptides pour déterminer la séquence des peptides récupérés.
Spectromètre de masse pour chromatographe liquide haute performance LCMS-2020

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