Développement de méthodes MRM pour les anticorps monoclonaux
Les anticorps monoclonaux, ou mAb, sont utilisés depuis plus d’une décennie dans le traitement d’un certain nombre de maladies, mais principalement dans le traitement du cancer et des maladies auto-immunes. La quantification des mAb thérapeutiques dans des échantillons biologiques a été traditionnellement abordée par des tests de liaison de ligands (LBA), cependant, il existe des limitations majeures en termes de temps de développement de méthodes prolongés, d'approvisionnement en réactifs et d'effets de matrice.
Les méthodes LC-MS/MS apparaissent comme une approche alternative aux LBA et cet article décrit l'application des méthodes MRM à la quantification de fragments peptidiques contenant des CDR d'anticorps β-amyloïde (6E10) (régions déterminant la complémentarité). Les CDR sont ciblés par LC-MS/MS car les anticorps partagent une séquence conservée et ne sont différenciés que par les trois boucles (CDR1-3) qui sont diverses et contiennent des peptides spécifiques des anticorps. Grâce à la sélectivité, la détection de CDR1-3 par LC-MS/MS aide à caractériser et quantifier les anticorps spécifiques à la maladie isolés du sérum ou du plasma de patients et peut être utilisée pour identifier différents agents thérapeutiques.
Les systèmes Shimadzu LCMS-8050/8060 ont été utilisés pour identifier les fragments peptidiques CDR1-3 suite à une digestion tryptique et à une optimisation du logiciel Skyline1). La méthode MRM a été mise en place pour détecter spécifiquement les fragments peptidiques contenant des CDR d’anticorps β-amyloïde (6E10).
Skyline a été utilisé pour prédire la séquence peptidique pour la détection LC-MS/MS et également pour optimiser la réponse pour chaque ion précurseur et ion produit généré. La méthode d’analyse MRM optimisée Skyline pour CDR1-3 a ensuite été utilisée pour acquérir des données LC-MS/MS hautement spécifiques et sensibles.
1) Skyline est un logiciel développé par le MacCoss Lab of Biological Mass Spectrometry de l'Université de Washington.
Fig. 1 Création de méthodes d'analyse à l'aide de Skyline (sélection de fragments de digestion par trypsine contenant des CDR)
Fig. 2 Détection de fragments de trypsine contenant CDR1-3 à l'aide d'anticorps monoclonaux standards (6E10) soumis à une digestion par la trypsine (analyse des données par Skyline)
Fig. 3 Courbe d'étalonnage pour les peptides sélectionnés avec trois transitions.
LCMS-8060
Le LCMS-8060 est une innovation révolutionnaire en matière de spectrométrie de masse qui contribue à transformer la qualité des données LC/MS/MS en développant une nouvelle vision de la sensibilité et de la vitesse.
LCMS-8050
Le LCMS-8050 est capable d'obtenir simultanément des informations qualitatives et quantitatives en une seule analyse