4-2) Effets néfastes des niveaux élevés ou changeants d'oxygène dissous sur la détection des UV

Effets néfastes de niveaux élevés ou changeants d'oxygène dissous sur la détection UV

Pour certains solvants organiques, si le niveau d'oxygène dissous est élevé, l'absorbance augmente de manière significative. Dit autrement, cela signifie que le dégazage peut réduire le niveau de fond causé par l'absorption de la phase mobile. Par exemple, si le méthanol saturé en air dissous (où l'oxygène a une pression partielle de 0,2 atmosphère) est utilisé comme phase mobile et mesuré à 210 nm, le fond peut être réduit de plus de 0,32 AU par dégazage avec purge d'hélium (Figure 16). Par conséquent, si le niveau d'oxygène dissous est élevé, il va sans dire que le niveau de bruit est élevé, mais si la température de la phase mobile change ou si d'autres facteurs peuvent modifier le niveau d'oxygène dissous, les fluctuations de la ligne de base augmentent également. Si mesuré avec une plage d'échelle complète de 0,01 AU, un changement de 1 % de l'oxygène dissous entraîne un changement de la ligne de base de plus de 30 % de l'échelle complète. Le mélange de gradients avec du méthanol ayant un niveau élevé d'oxygène dissous peut augmenter la pente de la ligne de base (Figure 17) et des problèmes d'intégration des pics peuvent survenir.
Cet effet de l'oxygène dissous est significatif dans la région des courtes longueurs d'onde, mais a été confirmé s'étendre jusqu'à des longueurs d'onde relativement longues pour le tétrahydrofurane (THF). L'effet relatif à 254 nm est exprimé par l'inégalité THF > méthanol > acétonitrile > eau. En revanche, cet effet n'apparaît pas pour l'acétonitrile (qualité LC) même à des longueurs d'onde courtes. Par conséquent, l'augmentation de l'absorbance semble ne pas être due à l'absorption par l'oxygène lui-même, mais à une sorte d'interaction unique entre l'oxygène et le solvant ou ses impuretés.
En règle générale, de l'acétonitrile de qualité LC devrait être utilisé pour des analyses de haute sensibilité dans la région des courtes longueurs d'onde UV. Cependant, si le méthanol ou le THF doivent être utilisés en raison de la sélectivité de séparation, il est nécessaire de dégazer la solution pour réduire le niveau d'oxygène dissous et également de le maintenir à un niveau constant.