Analyse des modifications post-traductionnelles | Analyse de phosphorylation par MALDI-TOF MS (2)

Analyse de séquence de phosphopeptides par Seamless PSD

Récemment, la spectrométrie de masse a été appliquée à l’analyse des sites de phosphorylation et de phosphorylation des protéines. Les sites de phosphorylation sont déterminés par divers types de MS/MS.

Une méthode d'analyse des sites de modification de phosphorylation utilisant la PSD transparente (sPSD) avec la méthode MALDI est décrite ci-dessous.
La dissociation induite par collision (CID) est couramment utilisée pour l'analyse des séquences d'acides aminés par MALDI-MS/MS. Cependant, en raison de la dissociation des groupements phosphate fragiles provoquée par les collisions avec le gaz inerte, il est difficile d'obtenir des informations sur les sites de phosphorylation par cette méthode.
Les mesures MS/MS utilisant la PSD sans soudure (sPSD) ne nécessitent aucun gaz inerte et peuvent obtenir des spectres MS/MS avec une certaine suppression de la dissociation des groupes phosphate.

La figure 1 montre le spectre PSD transparent (sPSD) d'un peptide doublement phosphorylé obtenu en utilisant le DHB comme matrice. D'après les résultats de l'attribution des ions fragments sur la figure 1, il apparaît que les ions y, qui sont les fragments C-terminaux, sont formés préférentiellement.
Bien qu'une dissociation du groupe phosphate des ions fragments ait été observée, l'intensité est faible (y7-98 dans le diagramme). Le spectre MS/MS obtenu est adéquat pour décoder la séquence entière à partir des masses des résidus d'acides aminés phosphorylés.

Fig. 1 Spectre sPSD du fragment MAP Kinase 177-189 (un peptide doublement phosphorylé)

 

On sait que cet effet est amplifié lorsque le DHB est utilisé, mais le PSD conventionnel n'était pas pratique en raison d'une sensibilité de détection des ions fragments insuffisante. Une caractéristique majeure du sPSD est son efficacité de génération d’ions fragments supérieure à celle du PSD. Ce niveau pratique de sensibilité permet des mesures MS/MS des phosphopeptides.

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