Cartographie peptidique | Analyse LC/MS des protéines et des peptides
Analyse de la myoglobine du cœur de cheval
Les médicaments protéiques étaient auparavant fabriqués à partir de protéines raffinées provenant d’organismes vivants. Cependant, ils sont récemment produits grâce à la technologie recombinante. L'insuline, l'interféron et l'érythropoïétine sont sur le marché en tant que médicaments protéiques fabriqués par recombinaison.
La confirmation de l’expression des protéines recombinantes est importante du point de vue du contrôle qualité. Les méthodes appliquées à cet effet comprennent l'analyse de la séquence d'acides aminés par séquenceur peptidique et d'autres méthodes plus simples telles que la cartographie peptidique par HPLC ou la cartographie de masse par MALDI-TOF MS.
L’analyse des protéines et la cartographie de masse peptidique d’un échantillon modèle de myoglobine cardiaque de cheval par LC/MS à l’aide d’un spectromètre de masse quadripolaire sont présentées ci-dessous.
La figure 1 montre le chromatogramme ionique total de la digestion par la trypsine de la myoglobine du cœur de cheval.
Fig. 1 Chromatogramme d'ions totaux de trypsine Digest de myoglobine
La figure 2 montre les séquences d'acides aminés de peptides dérivés de la myoglobine de cœur de cheval obtenues en utilisant ce procédé. Toutes les régions de la séquence d'acides aminés de la myoglobine sont couvertes, à l'exception de la lysine libre. (Les peptides récupérés sont soulignés dans le diagramme.)
Fig. 2 Séquences d'acides aminés de la myoglobine du cœur de cheval
La LC/MS s'avère efficace pour confirmer l'expression de protéines recombinantes, confirmer les changements structurels dans les peptides de structure connue et pour obtenir des informations sur la masse moléculaire pour compléter les données d'un séquenceur peptidique.
L’analyse de la composition en acides aminés utilisée en parallèle est efficace pour confirmer la composition des peptides contenant des acides aminés. De plus, l’analyse MS/MS par spectromètre de masse hybride LCMS-IT-TOF est efficace pour le séquençage de novo de peptides de structure inconnue.
Spectromètre de masse par chromatographe liquide haute performance
- Les spectromètres de masse à chromatographe liquide haute performance Prominence utilisent un mécanisme de pompage à piston microvolumique pour obtenir une superbe reproductibilité du temps de rétention et une cartographie peptidique très précise.
- La vitesse de balayage élevée et la commutation d'ions positifs-négatifs du spectromètre de masse à chromatographe liquide haute performance LCMS-2020 garantissent qu'aucun peptide n'est oublié.
- La station de travail LCMSsolution pour LCMS-2020 relie les données LC et MS pour fournir un outil puissant pour la cartographie peptidique.