Séquençage des acides aminés N-terminaux d'anticorps monoclonaux de souris à l'aide de la méthode Edman
L'analyse structurale N-terminale est la première étape de l'analyse structurale des protéines. Cette analyse utilise la méthode Edman (clivage séquentiel des acides aminés du N-terminal de la protéine pour déterminer la séquence d'acides aminés), qui est la méthode la plus fiable pour déterminer les séquences d'acides aminés.
Le système de séquenceur de protéines PPSQ-31A/33A automatise la réaction d'Edman, la séparation et la détection HPLC, ainsi que l'analyse des données pour déterminer la séquence d'acides aminés à partir du N-terminal.
Le séquençage des acides aminés N-terminaux des anticorps monoclonaux de souris utilisant la méthode Edman est présenté ci-dessous.
Flux de test et de recherche
1. Soumettre les anticorps monoclonaux de souris (60 pmol) à SDS-PAGE (dans des conditions réductrices).
2. Après l'électrophorèse, effectuez un électrotransfert sur une membrane PVDF et colorez-la avec du CBB.
3. Excisez les régions encerclées sur la figure 1 et analysez-les par PPSQ-31A.
Fig.1 Membrane PVDF
La figure 2 montre les résultats d'analyse de la chaîne légère jusqu'au cycle 5.
Les résultats du cycle 1 indiquent que le résidu d'acide aminé N-terminal est D (acide aspartique). Les résultats du cycle 2 indiquent que le deuxième groupe d'acides aminés du N-terminal est V (valine). L'analyse du 21ème résidu révèle que la séquence du N-terminal est : Asp-Val-Val-Met-Thr-Gln-Thr-Pro-Leu-Thr-Leu-Ser-Val-Thr-Ile-Gly-Gln- Pro-Ala-Ser-Ile.
Fig. 2 Résultats de la chaîne légère (le cycle 2 et au-delà sont des chromatogrammes différentiels)
La figure 3 montre les résultats d'analyse de la chaîne lourde jusqu'au cycle 5.
Le pic du dérivé d'acide aminé PTH n'est pas exprimé, ce qui indique que le groupe amino N-terminal (groupe amino α) de la chaîne lourde est modifié.
Fig. 3 Résultats des chaînes lourdes (le cycle 2 et au-delà sont des chromatogrammes différentiels )
Séquenceur de protéines
Caractéristiques :
Le PPSQ-51A/53A perpétue la tradition consistant à fournir aux chercheurs un séquençage fiable et sensible des protéines N-terminales grâce à la dégradation Edman automatisée. Qu'il s'agisse de passer d'un autre séquenceur ou d'adopter la technique pour la première fois, le logiciel intuitif et le matériel Shimadzu robuste faciliteront le séquençage des protéines dans votre laboratoire.