Mesure du poids moléculaire des glycoprotéines à l'aide d'un spectromètre de masse MALDI-TOF de paillasse
Les spectromètres de masse MALDI-TOF sont un type de spectromètre de masse utilisé dans un large éventail de domaines, tout comme le LCMS, en termes de débit élevé et de sensibilité élevée. Ces instruments sont de plus en plus utilisés pour la mesure simple du poids moléculaire et le profilage des produits synthétisés et des composés de haut poids moléculaire. En effet, les instruments de ce type présentent plusieurs caractéristiques : des ions à charge unique sont générés afin que les poids moléculaires puissent être reconnus facilement, la plage de masse applicable est large et il existe de nombreuses options de solvants car l'échantillon est séché avant la mesure.
D'un autre côté, en raison de l'évolution des conditions sociales au cours de ces dernières années, les administrations et les entreprises privées demandent fortement la réduction des coûts d'introduction et de fonctionnement des instruments utilisés pour de telles applications. Le spectromètre de masse MALDI-TOF « MALDI-8020 » est un nouvel instrument capable de répondre suffisamment à ces besoins du marché. Le point remarquable de cet instrument est qu'il dispose d'un tube de vol plus court, ce qui est la caractéristique clé de sa petite taille, tout en conservant des performances égales ou supérieures à celles d'un modèle classique.
La mesure du poids moléculaire des protéines modulée par modification post-traduction à l'aide d'un spectromètre de masse MALDI-TOF est l'application la plus fondamentale dans les domaines de la biochimie et de la biologie moléculaire. Les poids moléculaires des glycoprotéines, en particulier, sont observés comme une distribution des poids moléculaires de plusieurs composants car ils sont hétérogènes en raison de la différence dans leurs structures de chaîne de sucre.
Cet article présente un exemple de mesure des poids moléculaires de ces glycoprotéines à l’aide du spectromètre de masse MALDI-TOF de paillasse « MALDI-8020 ».
Exemple de mesure du poids moléculaire des glycoprotéines
La figure 1 montre la séquence d'acides aminés de la ribonucléase B. On sait qu'en raison de la glycosylation liée à l'azote du type à haute teneur en mannose, cette protéine est détectée dont le composant principal est une modification d'env. 1217 supérieure à sa masse intrinsèque. La ribonucléase B d'origine bovine (5 pmol) a été mélangée avec de l'acide férulique (10 mg/mL, solution à 50 % d'acétonitrile/0,1 % d'acide formique) et analysée en mode linéaire à l'aide du MALDI-8020. Le résultat est présenté sur la figure 2. La molécule protonée à charge unique de la ribonucléase B détectée est détectée à m/z 14 890, ce qui est cohérent avec la valeur théorique (14 899,3). De plus, la répartition due aux chaînes de sucres hétérogènes est détectée comme une différence de masse (valeur théorique : 162) dérivée de l'hexose. Comme indiqué ci-dessus, le pouvoir de résolution, la précision de masse, etc. du mode linéaire du MALDI-8020 sont comparables à ceux d'un plus grand spectromètre de masse MALDI-TOF conventionnel dans le même mode.
Fig.1 Séquence d'acides aminés et glycosylation de la ribonucléase B
Fig.2 Spectre de masse de la ribonucléase B
MALDI-TOF MS "MALDI-8020"
Principales caractéristiques:
- Mode linéaire (ion positif) MALDI-TOF
- Laser à semi-conducteurs 200 Hz, 355 nm
- Chambre de verrouillage de charge pour une introduction rapide des échantillons
- Nettoyage de source par laser UV (breveté)
- Conception à faible encombrement/paillasse
- Fonctionnement silencieux (<55 dB)