À propos de la LC bidimensionnelle complète
Qu'est-ce que la Chromatographie Multidimensionnelle ?
La chromatographie multidimensionnelle utilise une combinaison de plusieurs techniques de chromatographie, modes de séparation et colonnes pour séparer plusieurs composants. Elle atteint une séparation significativement plus élevée que la chromatographie unidimensionnelle normale. Divers modes de séparation et les phases mobiles correspondantes peuvent être sélectionnés pour la HPLC, et les diverses permutations disponibles suggèrent la possibilité d'atteindre un degré de sélectivité qu'il n'est pas possible d'obtenir uniquement avec une séparation unidimensionnelle.
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Qu'est-ce que la LC à Deux Dimensions Complète ?
La LC à deux dimensions est une technique de chromatographie multidimensionnelle HPLC couramment utilisée. Elle est parfois appelée "LC×LC". L'une des techniques de LC à deux dimensions est la LC à deux dimensions complète, dans laquelle tout l'éluté de la colonne de première dimension est introduit en ligne dans la colonne de seconde dimension, de sorte que l'échantillon entier subisse une séparation à deux dimensions.
Fig.1 Différences entre une séparation mono-dimensionnelle conventionnelle et une séparation multi-dimensionnelle
Configuration du Système pour la LC à Deux Dimensions Complète
La Fig. 2 montre la configuration du système pour la LC à deux dimensions complète. Ce système permet l'élution en gradient à la fois aux étapes de première et de seconde dimension. La solution d'échantillon est injectée par l'auto-échantillonneur et séparée dans la colonne de première dimension. Le débit de l'échantillon est généralement faible dans la colonne de première dimension (par exemple, 50 μL/min) pour permettre une séparation sur une longue période. L'éluté de la première colonne est envoyé à la boucle de la vanne de commutation de flux.
Lorsque la boucle est pleine (après deux minutes à un débit de 50 μL/min avec la boucle de 100 μL utilisée dans cet exemple), la vanne fonctionne pour envoyer l'éluté pour séparation dans la colonne de seconde dimension. Comme la vanne de commutation de flux fonctionne toutes les deux minutes dans l'exemple présenté ici, l'analyse dans la colonne de seconde dimension (y compris le temps d'équilibrage de la colonne pour l'élution en gradient) doit être terminée dans les deux minutes.
Une colonne UHPLC (chromatographie liquide à ultra haute performance) a été adoptée ces dernières années comme colonne de seconde dimension afin d'atteindre un degré de séparation suffisamment élevé en environ une minute.
Fig.2 Exemple de Configuration de Système pour la LC à Deux Dimensions Complète
Exemple d'Analyse par LC à Deux Dimensions Complète
La Fig. 3 montre l'analyse d'un granule d'extrait de Kakkonto utilisant un système LC à deux dimensions complète.
L'échantillon a été séparé en utilisant une colonne de phase inversée semi-micro (100 mm × 1,5 mm I.D., 2,2 µm) et une phase mobile à pH neutre pour la première dimension et une colonne de phase inversée à ultra-haute vitesse (50 mm × 2,1 mm I.D., 2,7 µm) et une phase mobile à pH acide pour la seconde dimension.
L'alignement des pics dans la direction de l'axe vertical (seconde dimension) indique la séparation des composants dans la colonne de seconde dimension qui n'ont pas pu être séparés dans la colonne de première dimension. Par conséquent, on peut dire que la LC à deux dimensions complète est capable de séparer des composants dans la seconde dimension qui n'ont pas pu être séparés dans la première dimension.
Fig.3 Graphiques 2D Complets des Granules d'Extraits de Kakkonto utilisant la LC à Deux Dimensions Complète
