Q : J'envisage de remplacer le liquide de nettoyage de la colonne (et la phase mobile) par du méthanol. Quelle proportion dois-je utiliser et quel débit dois-je fixer ?

A :

Consultez le manuel d'instructions de votre colonne pour vérifier si le méthanol peut être utilisé avec celle-ci. Avant de délivrer un solvant avec une forte proportion de méthanol, afin de prévenir la précipitation de sel dans la phase mobile (par exemple, solution tampon), délivrez d'abord un volume de méthanol et d'eau, mélangé dans le même ratio que l'acétonitrile et l'eau actuellement utilisés (par exemple, lors du remplacement d'un mélange 4:6 de solution tampon phosphate 10 mM et d'acétonitrile, délivrez d'abord un mélange 4:6 d'eau et de méthanol), équivalent à environ cinq fois la capacité de la colonne, puis augmentez la proportion de méthanol. Par exemple, si vous avez effectué une analyse avec une proportion de 60 % d'acétonitrile, essayez d'utiliser une proportion de 80 % de méthanol. Si la proportion de méthanol est supérieure ou égale à la proportion d'acétonitrile, le sel ne précipite normalement pas puisque le méthanol/eau a une plus grande solubilité de sel que l'acétonitrile/eau.
Si le méthanol est utilisé à la place de l'acétonitrile, la pression peut augmenter. Délivrez la phase mobile à environ la moitié du débit utilisé en analyse, puis augmentez-le dans la plage de pression maximale de la colonne tout en observant l'effet. Des précautions sont nécessaires en analyse par gradient car la pression peut augmenter à mesure que la proportion de solvant organique augmente. Pour être en sécurité, il est préférable de définir "P.Max" pour la pompe. (C'est la pression maximale à laquelle la livraison est possible. La livraison s'arrête si la pression dépasse ce réglage.)