Q : Quels sont les points à prendre en considération lors du remplacement de l'acétonitrile par le méthanol ?
A :
Conditions Analytiques :
- Il est possible que la séparation des impuretés et l'ordre d'élution changent, donc, en plus du temps de rétention du composant cible, considérez les schémas de séparation par rapport aux autres composants.
(Le méthanol est un solvant protique alors que l'acétonitrile est un solvant aprotique. Simultanément à l'interaction hydrophobe, l'affinité protonique influence l'analyse. Par exemple, en ce qui concerne les composés avec des groupes fonctionnels qui fournissent des protons, tels que les groupes –COOH, dans un système eau/acétonitrile, les composés et le CN dans l'acétonitrile (CH3CN) s'attirent mutuellement, ce qui peut accélérer l'élution, mais dans un système eau/méthanol, cette interaction est plus faible et l'élution peut donc être plus lente. En revanche, pour les composés dans lesquels des groupes –NH2 sont attachés à des anneaux aromatiques, dans un système eau/méthanol, l'hydrogène dans le méthanol et les paires d'électrons solitaires dans l'azote des groupes -NH2 s'attirent mutuellement, et donc l'élution peut être plus rapide qu'avec un système eau/acétonitrile.)
- Si l'élution semble être trop rapide globalement et que la séparation semble être mauvaise, essayez de diminuer la proportion de méthanol. Inversement, si l'élution est trop lente, essayez d'augmenter la proportion de méthanol.
- Consultez le manuel d'instructions de votre colonne pour vérifier si le méthanol peut être utilisé avec celle-ci.
Pression Appliquée à la Colonne :
- Comme le montre la figure à droite, la pression appliquée lorsque le méthanol est utilisé est supérieure à celle lorsque l'acétonitrile est utilisé. Par exemple, si vous passez d'un mélange 6:4 d'eau et d'acétonitrile à un mélange 4:6 d'eau et de méthanol, la pression augmente d'un facteur supérieur à 1,5. Délivrez la phase mobile à environ la moitié du débit utilisé en analyse, puis augmentez-le dans la plage de pression maximale de la colonne tout en observant l'effet. Des précautions sont nécessaires en analyse par gradient car la pression peut augmenter à mesure que la proportion de solvant organique augmente. Pour être en sécurité, il est préférable de définir "P.Max" pour la pompe. (C'est la pression maximale à laquelle la livraison est possible. La livraison s'arrête si la pression dépasse ce réglage.)
Détection UV :
- En raison d'une grande quantité d'absorption dans la région des courtes longueurs d'onde, en fonction de la longueur d'onde de détection, il peut être difficile de stabiliser la ligne de base ou il peut y avoir beaucoup de bruit. Considérez ce point dans l'analyse à haute sensibilité.
Remplacement de Solvant :
- Avant de délivrer un solvant avec une forte proportion de méthanol, afin de prévenir la précipitation de sel, délivrez d'abord un volume de méthanol et d'eau, mélangé dans le même ratio que l'acétonitrile et l'eau actuellement utilisés, équivalent à environ cinq fois la capacité de la colonne (par exemple, environ 12,5 mL dans le cas d'une colonne de 150 mm × 4,6 mm I.D.), puis augmentez la proportion de méthanol. Si la proportion de solvant organique est la même, le sel ne précipite normalement pas puisque le méthanol/eau a une plus grande solubilité de sel que l'acétonitrile/eau.
