Eau utilisée pour l'HPLC
Dans l'analyse HPLC, l'eau est essentielle pour préparer les phases mobiles et les échantillons. Cependant, si des impuretés sont présentes dans une phase mobile, elles peuvent augmenter les signaux de fond, ce qui peut accroître le bruit de base, la dérive, ou provoquer d'autres phénomènes, tels que des pics négatifs ou inconnus lors de l'élution par gradient.
De même, si des impuretés sont présentes dans les solutions d'échantillons, elles peuvent causer des pics inconnus. Si les impuretés incluent un composant cible analysé, elles peuvent même affecter les valeurs de quantification. Pour éviter de lutter contre de tels problèmes et pour augmenter la fiabilité des données, cet article discute des bases concernant l'eau.
Quelle est la pureté de l'eau ?
Quel niveau de pureté est nécessaire pour l'analyse HPLC ? La norme JIS K 0124 : 2013 "Règles générales pour la chromatographie liquide à haute performance" spécifie ce qui suit (extrait).
L'eau utilisée pour cette norme doit être purifiée par une combinaison d'osmose inverse, de distillation, d'échange d'ions, d'irradiation ultraviolette, de filtration ou d'autres méthodes, et doit avoir un niveau de qualité de l'eau qui n'interfère pas avec l'analyse. La qualité de l'eau doit être évaluée en fonction de valeurs indicatives telles que la résistance spécifique, la matière organique totale (MOT) ou les valeurs d'absorbance.
Ce qui suit discute de la pureté de l'eau en des termes plus spécifiques.
Quelle eau doit être utilisée en chromatographie en phase inverse ?
Étant donné que la chromatographie en phase inverse est généralement utilisée comme technique pour analyser ou séparer des substances organiques, l'eau utilisée pour préparer les phases mobiles ou les échantillons doit être suffisamment exempte de toute matière organique, mais le niveau de pureté requis dépend du détecteur spécifique utilisé.
Si vous utilisez un détecteur d'absorption ultraviolette, il est normalement recommandé d'utiliser de l'eau distillée de qualité HPLC commerciale. Les impuretés avec une absorbance dans la région UV sont éliminées de l'eau distillée de qualité HPLC commerciale et les niveaux d'absorbance dans les régions de longueurs d'onde plus courtes sont garantis. Par conséquent, l'eau de qualité HPLC peut généralement être utilisée sans souci. Cependant, si vous purifiez l'eau vous-même, la distillation et la filtration par échange d'ions seules sont généralement insuffisantes. Au lieu de cela, un système de production d'eau ultra-pure est fortement recommandé. Ces dernières années, la tendance a été d'utiliser des systèmes de production d'eau ultra-pure capables de réduire la teneur en carbone organique total (carbone organique total ou TOC) en utilisant l'irradiation ultraviolette pour décomposer la matière organique. En particulier, dans le cas de l'élution par gradient, la différence des niveaux de TOC peut affecter de manière significative l'apparition de pics fantômes. D'autre part, si un détecteur de fluorescence et un spectromètre de masse sont utilisés, l'eau distillée de qualité HPLC commerciale peut être inadéquate. Dans de tels cas, utilisez soit de l'eau de qualité d'analyse de fluorescence, soit de l'eau de qualité LCMS, ou utilisez un système de production d'eau ultra-pure. Notez que la norme JIS K 0211 : 2013 "Termes techniques pour la chimie analytique (partie générale)" définit l'eau ultra-pure comme suit (extrait).
a) Eau purifiée avec une valeur de TOC extrêmement faible et une résistance de 18 MΩ·cm ou plus (conductivité électrique de 0,056 μS/cm ou moins).
b) Eau purifiée à l'aide d'une combinaison de méthodes, telles que des membranes d'osmose inverse, des polymères d'échange d'ions (y compris des substances d'échange d'ions continues), du charbon actif, des rayons ultraviolets et de l'ultrafiltration, de sorte que la résistance soit de 18 MΩ·cm ou plus (conductivité électrique de 0,056 μS/cm ou moins).
Quelle eau doit être utilisée pour la chromatographie ionique ?
Étant donné que la chromatographie ionique est essentiellement une technique analytique utilisée pour mesurer des substances ioniques, le point le plus important est d'utiliser de l'eau dont les ions ont été suffisamment éliminés. Il est préférable d'utiliser de l'eau provenant d'un système de production d'eau ultra-pure avec une résistance spécifique de 18 MΩ·cm ou plus.
La qualité de l'eau distillée de qualité HPLC commerciale est garantie pour une utilisation dans l'analyse utilisant des détecteurs d'absorption UV, comme mentionné ci-dessus, mais elle n'est pas nécessairement garantie pour l'analyse des ions inorganiques. Par conséquent, vous devez confirmer que l'eau ne provoque aucun problème d'analyse avant de l'utiliser. En général, l'eau commerciale marquée comme eau échangée ou eau purifiée n'est pas recommandée, car la qualité peut varier en fonction du fabricant. Sur la base des points ci-dessus, on peut dire que pour la chromatographie ionique, l'utilisation d'eau fraîchement purifiée provenant d'un système de production d'eau ultra-pure fournira des résultats plus fiables et sans souci.
Quelle est la bonne façon de manipuler l'eau ?
Plus la pureté de l'eau est élevée, plus il est nécessaire de faire preuve de soin dans sa manipulation. L'eau est capable de dissoudre une grande variété de substances, donc la contamination commence dès qu'elle entre en contact avec l'air. Si de l'eau commerciale est utilisée, elle doit être consommée dès que possible. Il est important de maintenir régulièrement les systèmes de production d'eau ultra-pure. Il est également important de minimiser le contact avec l'air en évitant de générer des bulles lors de l'acquisition d'eau commerciale ou purifiée à partir d'un système de production d'eau ultra-pure. Essayez également d'ajouter de l'eau directement dans le récipient de préparation et minimisez l'utilisation des bouteilles de lavage. L'eau dans les bouteilles de lavage peut facilement être contaminée et peut contenir des plastifiants lessivés des parois internes de la bouteille en plastique. (Remplacez souvent l'eau dans les bouteilles de lavage.) Inutile de dire qu'il faut toujours pré-laver l'équipement avec de l'eau fraîche avant utilisation.
