Facteurs d'erreur de quantification dans la préparation des échantillons
Les processus impliqués dans l'analyse par HPLC peuvent être catégorisés comme préparation de l'échantillon, injection, séparation, détection et traitement des données. Des facteurs pouvant affecter l'erreur de quantification sont présents dans toutes ces étapes, mais ici nous nous concentrons sur les facteurs dans la phase de préparation de l'échantillon.
Préparation des Solutions Standard
La tendance est de penser les choses trop simplement, mais il y a de nombreux facteurs à considérer, comme ceux du Tableau 1, par exemple.
Parmi ceux-ci, l'un des facteurs les plus importants est (K) l'Adsorption des Composants Cibles au Conteneur. Dans l'exemple montré au Tableau 2, dans certains cas, l'adsorption peut être supprimée en sélectionnant un solvant différent ou en changeant le matériau du conteneur. L'adsorption est également découverte en ne parvenant pas à obtenir la linéarité de la courbe d'étalonnage (ou la ligne ne passe pas par l'origine) lorsque la solution est diluée.
Un autre facteur important est (N) l'Oxydation ou la Décomposition des Composants Cibles. Par exemple, comme l'acide ascorbique est facilement oxydé par l'oxygène dissous ou les ions fer(III) dans une solution aqueuse, sa concentration diminue avec le temps. Si cela se produit, nous recommandons de réduire le niveau de pH ou de masquer les ions fer avec de l'EDTA ou du 2Na et d'injecter l'échantillon rapidement après la préparation. En général, pour inhiber l'oxydation et la décomposition, un agent réducteur est ajouté, l'atmosphère est purgée avec de l'azote, un solvant non aqueux est utilisé, une bouteille brune est utilisée et/ou la solution est stockée dans un endroit frais et sombre. L'oxydation et la décomposition sont également découvertes en raison de la réduction des valeurs de surface lorsque les solutions d'échantillon sont injectées plusieurs fois.
Opérations |
1) Mesurer le poids de la substance standard  |
2) Ajouter le solvant pour faire une solution  |
3) Conserver la solution  |
| Éléments Qui Causent des Facteurs d'Erreur | (A) Précision de mesure inadéquate (B) Erreur de l'opérateur lors de la mesure (C) Impuretés (D) Hydrates non confirmés (E) Hygroscopicité |
(F) Précision de l'appareil inadéquate (G) Erreur de l'opérateur lors du remplissage au volume (H) Erreur de l'opérateur lors de la dilution (I) Dissolution inadéquate (en tenant compte des changements de température également) (J) Non-homogénéité de la solution (K) Adsorption des composants cibles au conteneur (L) Introduction de composants cibles du conteneur ou de l'atmosphère (cas relativement spéciaux) |
(M) Évaporation du solvant (N) Oxydation/décomposition des composants cibles |
| Matériau | Exemples de Composants Facilement Adsorbés | Solvants pour Inhiber l'Adsorption |
| Verre | Cations (ammonium quaternaire et ions métalliques) Amines - Dépend de la liaison hydrogène des électrons du doublet non liant de l'azote |
• Réduire le pH • Ajouter des ions perchlorate • Ajouter des ions compétitifs |
| Métaux | Anions Composants chélatants (acides alpha-hydroxy, bêta-dicétones et tropolones) |
• Ajouter des ions compétitifs • Réduire le pH (ou augmenter, dans certains cas) • Ajouter un agent masquant les métaux |
| Polymères Synthétiques | Composants hautement hydrophobes | • Réduire la polarité |
Prétraitement des Échantillons
Cette opération implique des problèmes supplémentaires avec les taux d'extraction et de récupération. Dans certains cas, des taux de récupération élevés ne peuvent pas être atteints ou les taux de récupération ne se stabilisent pas pendant des processus tels que l'extraction solide-liquide (y compris une colonne de prétraitement) ou l'extraction liquide-liquide. Lors des opérations de déprotéinisation également, les composants cibles peuvent s'adsorber aux protéines dénaturées et réduire le taux de récupération.
Normalement, les taux de récupération sont évalués en ajoutant et en extrayant des composants cibles des échantillons. En d'autres termes, il s'agit d'examiner comment la relation entre la quantité de composants cibles ajoutés et l'augmentation des surfaces des pics dans un chromatogramme change par rapport aux résultats obtenus lorsque la solution de composant cible est injectée directement sans opérations d'extraction.
S'il y a un problème avec les taux de récupération, la méthode d'extraction doit être modifiée, ou les composants doivent être extraits après l'ajout d'une substance standard interne. Dans ce cas, la substance standard interne doit avoir une structure chimique similaire aux composants cibles et à peu près la même efficacité d'extraction (voir LCtalk vol. 25, p. 5). Cette méthode de prétraitement est souvent utilisée lorsque le taux de récupération est relativement stable, même s'il n'est pas de 100 %.
Pour assurer une bonne précision analytique, réfléchissez régulièrement aux facteurs qui affectent les niveaux d'erreur nécessitant une attention particulière dans votre propre travail analytique et s'il y a des problèmes qui se produisent.
(Y.Eg)
