Confirmation de l'intégration des pics
Où commencez-vous à vérifier lorsque la reproductibilité des zones de pic ou des valeurs de quantification est médiocre ? Devez-vous soupçonner un dysfonctionnement de la pompe ou de l'autoinjecteur et commencer à inspecter l'équipement ?
Non, attendez une minute. Tout d'abord, vérifiez si les pics du chromatogramme sont intégrés correctement et si la ligne de correction de la ligne de base est appropriée. Une légère différence dans les paramètres d'intégration des pics peut faire une grande différence. En fait, en examinant un peu les données, il peut être possible d'éviter le tracas d'acquérir à nouveau des données.
1. Élimination du bruit et d'autres pics indésirables
Valeur de largeur et détection de pic
Dans certains cas, les pics ne sont pas intégrés correctement car les pics cibles contiennent du bruit. Dans de tels cas, vérifiez que les paramètres d'intégration des pics (ou les commandes d'intégration des pics) dans la méthode (fichier analytique) utilisée pour analyser les données sont appropriés. Dans certains cas, la manière dont le pic est détecté peut être modifiée en changeant le paramètre de largeur, comme montré à droite.
FWHM
Normalement, le bruit indésirable ou d'autres pics peuvent être éliminés en réglant [WIDTH] (unités : secondes) à une valeur supérieure à la largeur à mi-hauteur (FWHM) des pics indésirables ou en réglant [SLOPE] (unités : µV/sec) à une valeur supérieure à la pente de départ des pics indésirables.
Pente des pics
(Dans LCsolution, les réglages [WIDTH] et [SLOPE] peuvent être définis en cliquant sur [Méthode] - [Paramètres d'analyse des données] - l'onglet [Intégration].)
Remarque : Plutôt que de changer les paramètres d'intégration des pics pour chaque ensemble de données, définissez ces paramètres lors du développement d'une méthode afin que les pics puissent être intégrés en utilisant les mêmes paramètres d'intégration pour toutes les données mesurées dans les mêmes conditions analytiques.
2. Intégration des pics non séparés
• Utilisation de programmes de temps
Programme de temps d'intégration LCsolution
Même si une intégration appropriée n'est pas possible en utilisant les paramètres d'intégration des pics réguliers, une intégration appropriée peut être possible en utilisant un programme de temps qui spécifie l'intégration à des moments spécifiques ([Programme de temps d'intégration] dans LCsolution).
Les figures A à D montrent comment la méthode utilisée pour intégrer les pics dans le même chromatogramme peut avoir un grand impact sur les valeurs de surface.
Dans la figure A, une ligne de correction de la ligne de base est tracée à partir d'un pic négatif indésirable, de sorte que les surfaces de pic calculées soient excessivement grandes. Si le [Rejet des pics négatifs] est spécifié dans le programme de temps (commençant après 0,5 minute et se nettoyant après 2 minutes), les effets des pics négatifs sont éliminés, comme montré dans la figure B.
(Dans LCsolution, les pics négatifs peuvent être rejetés en spécifiant
[Rejet des pics négatifs]
Fig. A Sans rejeter les pics négatifs indésirables
Ensuite, en changeant le réglage [Drift] (voir figure ci-dessous), il est possible de sélectionner soit un partitionnement vertical (Fig. B) soit un partitionnement de la ligne de base (Fig. C).
Relation entre les lignes de réglage DRIFT et la ligne de correction de la ligne de base
- Puisque le point B est plus haut que la ligne de réglage DRIFT à partir du point A et que le point C est plus bas, la ligne de correction de la ligne de base est la ligne A-C.
- Puisque le point D est plus bas que la ligne de réglage DRIFT à partir du point C, la ligne de correction de la ligne de base est la ligne C-D.
Fig. B Partitionnement vertical
Fig. C Partitionnement de la ligne de base
(Dans LCsolution, les lignes DRIFT peuvent être modifiées via le [Drift] réglage.)
Si une traînée forcée est utilisée (commençant après 2 minutes et se nettoyant après 6 minutes), l'intégration des pics est effectuée comme montré dans la figure D. Avec la traînée forcée, les pics dans d'autres intervalles non spécifiés sont partitionnés verticalement, même s'ils ont une forme de traînée.
(Dans LCsolution, la traînée forcée peut être spécifiée via le réglage d'intervalle ON/OFF à [Tailing].)
Ces commandes d'intégration des pics et changements de paramètres peuvent être spécifiés non seulement une fois, mais plusieurs fois en utilisant des programmes de temps d'intégration des pics.
(Il est recommandé de considérer les paramètres d'intégration des pics appropriés lors du développement de la méthode.)
Fig. D Traînée forcée
• Utilisation de l'intégration manuelle des pics
Idéalement, les mêmes paramètres d'intégration des pics devraient être utilisés pour analyser les données acquises dans des conditions analytiques similaires. Cependant, dans certains cas, les résultats d'intégration des pics souhaités ne peuvent pas être obtenus en utilisant ces programmes de temps d'intégration des pics ou il est souhaitable de déplacer le point de détection des pics individuels. Dans de tels cas, la ligne de correction de la ligne de base peut être changée manuellement en définissant des paramètres d'intégration des pics (ou des commandes d'intégration des pics) pour des ensembles de données individuels.
Pour le distinguer des paramètres d'intégration des pics (ou des commandes d'intégration des pics) pour les méthodes, il est appelé intégration manuelle des pics.
Par conséquent, comme décrit ci-dessus, l'un des facteurs qui déterminent la reproductibilité de la surface des pics peut être éliminé en prêtant une attention particulière aux réglages d'intégration des pics.
