Method Package en LCMSMS pour les acides gras à chaîne courte

 

Acides gras et acides organiques à chaîne courte ciblés pour l'analyse

Parmi les acides gras à chaîne courte produits par les bactéries intestinales, l'acide acétique, l'acide propionique et l'acide butyrique sont bien connus, et il a été montré qu'il existe certains liens entre eux et des maladies liées au mode de vie telles que l'obésité et le diabète. D'une manière générale, les acides gras à chaîne courte sont très volatils et hydrophiles. Il est donc difficile d'effectuer une analyse LCMS à l'aide d'un système de phase inverse classique. Pour cette raison, cet ensemble de méthodes cible les acides gras à chaîne courte (C2 à C5) qui ont été dérivatisés à l'aide de 3-nitrophénylhydrazine (3-NPH). En effectuant des réglages pour les transitions MRM, il peut être utilisé pour l'analyse simultanée (de 22 composants), y compris les acides organiques liés aux voies métaboliques centrales.

Acide gras à chaîne courte
Acide acétique
Acide propionique
Acide butyrique
Acide isobutyrique
Acide valérique
Acide isovalérique
Acides organiques
Acide 2-oxobutyrique
Acide 2-hydroxyglutarique
Acide α-ketoglutarique
Acide β-hydroxybutyrique
Acide Isocitrique
Acide Oxaloacetique
Acide Citrique
Acide Glyoxylique
Acide Glycolique
Acide Succinique
Acide Lactique
Acide Pyruvique
Acide Fumarique
Acide Maleique
Acide Malonique
Acide Malique

Paramètres de transition MRM

Lors des réglages de transition MRM, l'électivité peut être améliorée en spécifiant les ions produits caractéristiques des dérivés de 3-nitrophénylhydrazine. Notez que certains acides organiques ont un groupe carbonyle dérivé des cétones, donc les dérivés de 3-nitrophénylhydrazine qui ont réagi avec l'acide carboxylique et le groupe carbonyle sont ciblés pour la transition MRM.

Protocole de prétraitement incluant la dérivatisation

L'ensemble du protocole nécessaire au prétraitement, y compris l'étape de dérivatisation à l'aide de 3-nitrophénylhydrazine, est contenu dans le manuel d'instructions de cet ensemble de méthodes. En suivant ces procédures, un analyste devrait être en mesure d'exécuter l'ensemble du processus, de la dérivatisation à l'acquisition et à l'analyse des données, immédiatement après l'introduction du package.

Pour la dérivatisation à l'aide de 3-nitrophénylhydrazine, le carbodiimide est utilisé comme agent de condensation et la réaction se déroule dans des conditions douces. De plus, afin d'effectuer efficacement des réactions non seulement avec des acides gras à chaîne courte, mais également avec des acides organiques, ce paquet de méthodes comprend une dérivatisation utilisant du 3-NPH au lieu du 2-NPH le plus couramment utilisé. De plus, les dérivatisations du 3-NPH après les réactions sont stables, et l'analyse quantitative des acides gras à chaîne courte ou des acides organiques dans l'échantillon peut être effectuée par réaction avec une quantité appropriée de réactif de dérivatisation. De plus, comme les réactions ont lieu dans des solutions aqueuses utilisant ce réactif de dérivatisation, l'échantillon ne sera pas séché et les composants volatils ne seront pas perdus.

Derivatization Reaction with 3-nitrophenylhydrazine (3-NPH)

 
 
 

L'exemple suivant montre une analyse utilisant le LCMS-8060 d'une solution mixte standard d'acides gras à chaîne courte / acides organiques. Un chromatogramme MRM d'acides gras à chaîne courte / acides organiques dérivatisés à l'aide de 3-NPH est illustré. Comme on peut le voir, des séparations suffisantes des composants, tels que les isomères structuraux, l'acide butyrique, l'acide isobutyrique, l'acide fumarique, l'acide maléique, l'acide citrique et l'acide isocitrique ont été obtenues. Cet ensemble de méthodes comprend des transitions MRM qui ont été formulées au préalable afin d'optimiser les dérivatisations 3-NPH pour les acides gras / acides organiques à chaîne courte. En conséquence, les acides gras à chaîne courte (C2 à C5) et les acides organiques représentatifs des voies métaboliques centrales, qui sont difficiles à analyser en LCMS en utilisant un système classique à phase inversée, peuvent être analysés simultanément.

 

Remarques et précautions

  1. LabSolutions LCMS Ver. 5.91 (ou version ultérieure) est requis.
  2. Pour la recherche uniquement. Ne pas utiliser dans le sprocédures de diagnostic.
  3. Shimadzu ne donne aucune garantie concernant l'exactitude des informations incluses dans la base de données ou l'utilité des informations obtenues à l'aide de la base de données.

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